藥包材紅外、密度、氣體透過(guò)量、水蒸汽透過(guò)量等8個(gè)標準草案公示

 

來(lái)源：國家藥典委

 

 

我委擬制定包裝材料紅外光譜測定法、密度測定法、氣體透過(guò)量測定法和水蒸氣透過(guò)量測定法4個(gè)國家藥包材標準，為確保標準的科學(xué)性、合理性和適用性，現將擬制定的包裝材料紅外光譜測定法、密度測定法、氣體透過(guò)量測定法和水蒸氣透過(guò)量測定法4個(gè)國家藥包材標準第二次公示征求社會(huì )各界意見(jiàn)（詳見(jiàn)附件）。公示期為一個(gè)月。請相關(guān)單位認真研核，若有異議，請及時(shí)來(lái)函提交反饋意見(jiàn)，并附相關(guān)說(shuō)明、實(shí)驗數據和聯(lián)系方式。來(lái)函需加蓋公章，收文單位為“國家藥典委員會(huì )辦公室”，同時(shí)將公函掃描件電子版發(fā)送至指定郵箱。公示期滿(mǎn)未回復意見(jiàn)即視為對公示標準草案無(wú)異議。

 

聯(lián)系人：康笑博

電 話(huà)：010-67079620

電子郵件：421@chp.org.cn

收文單位：國家藥典委員會(huì )辦公室

地 址：北京市東城區法華南里11號樓

郵 編：100061

 

附件：包裝材料紅外光譜測定法公示稿（第二次）.pdf

密度測定法公示稿（第二次）.pdf

氣體透過(guò)量測定法公示稿（第二次）.pdf

水蒸氣透過(guò)量測定法公示稿（第二次）.pdf

 

包裝材料紅外光譜測定法

紅外分光光度法是在一定波數范圍內測定物質(zhì)的吸收光譜，主要用于藥品包裝材料的鑒 別。藥品包裝材料的紅外光譜檢測方法有透射和衰減全反射(Attenuated Total Reflection， ATR)等。透射是指通過(guò)測定透過(guò)供試品前后的紅外光強度變化，得到紅外透射光譜。衰減 全反射是指紅外光以一定的入射角度通過(guò) ATR 晶體后，在與晶體緊貼的供試品表面經(jīng)過(guò)多 次反射而得到反射光譜圖，可分為單點(diǎn)衰減全反射和平面衰減全反射。透射法一般測定 4000-400cm-1 波數范圍內的吸收光譜，衰減全反射法一般測定 4000-650cm-1 波數范圍內的吸 收光譜。

 

儀器及其校正

儀器及其校正照紅外分光光度法(通則 0402)要求。

供試品的制備及測定 通常采用熱敷法、膜法、熱裂解法、衰減全反射法、顯微紅外法等方法進(jìn)行測定。

 

第一法熱敷法

本法適用于塑料產(chǎn)品及粒料的紅外光譜測定。除另有規定外，將溴化鉀晶片或其它適宜

鹽片加熱后，趁熱將供試品輕擦于熱溴化鉀晶片或其它適宜鹽片上，以不冒煙為宜。常采用 透射法進(jìn)行測定。

 

第二法膜法

本法適用于塑料產(chǎn)品及粒料的紅外光譜測定。除另有規定外，取供試品適量，制成厚度 適宜均一的薄膜，常采用透射法進(jìn)行測定。常用的薄膜制備方式可采用熱壓成膜，或者加適 宜溶劑高溫回流使供試品溶解，趁熱將回流液涂在溴化鉀晶片上或其它適宜鹽片上，加熱揮 去溶劑等方式。

 

第三法熱裂解法

本法適用于橡膠產(chǎn)品的紅外光譜測定。除另有規定外，取供試品切成小塊，用適宜溶劑 抽提后烘干，再取適量置于玻璃試管底部后于酒精燈上加熱，當裂解產(chǎn)物冷凝在玻璃試管冷 端時(shí)，用毛細管取裂解物涂在溴化鉀晶片或其它適宜鹽片上，立刻采用透射法進(jìn)行測定。

 

第四法衰減全反射法(ATR 法)

本法適用于塑料產(chǎn)品及粒料、橡膠產(chǎn)品的紅外光譜測定。除另有規定外，取表面清潔平 整的供試品適量，與衰減全反射棱鏡底面緊密接觸，采用衰減全反射法進(jìn)行測定。

 

第五法顯微紅外法

本法適用于多層膜、袋、硬片等產(chǎn)品的紅外光譜測定。除另有規定外，用切片器將供試 品切成厚度小于 50μm 的薄片，置于顯微紅外儀上觀(guān)察供試品橫截面，選擇所需檢測的區域， 進(jìn)行測定。

起草單位:上海市食品藥品包裝材料測試所 復核單位:江西省藥品檢驗檢測研究院

電話(huà):021-50798250

 

密度測定法

密度系指在規定溫度下單位體積物質(zhì)的質(zhì)量。溫度為 t°C時(shí)的密度用ρt 表示，單位為 kg/m3、g/cm3。密度是藥品包裝材料的特性之一，可用于藥品包裝材料的鑒別。

 

藥品包裝材料的密度一般采用浸漬法測定。浸漬法系指供試品在規定溫度的浸漬液中， 所受到浮力的大小，等于供試品排開(kāi)浸漬液的體積與浸漬液密度的乘積。而浮力的大小可以 通過(guò)測量供試品的質(zhì)量與供試品在浸漬液中的質(zhì)量求得。

 

本法適用于除泡沫塑料以外的塑料容器(材料)的密度測定。

 

儀器

精度為 0.1mg 的天平，附密度測定裝置(溫度計的最小分度值為 0.5°C). 供試品的制備及測定供試品應在 23°C±2°C，相對濕度 50%±5%環(huán)境中放置 4 小時(shí)以上，然后在此條件下進(jìn)行試驗。供試品為除粉料以外的任何無(wú)氣孔材料，表面應光滑平整、無(wú)凹陷，清潔，無(wú)裂縫，無(wú)氣泡等缺陷。尺寸適宜，供試品質(zhì)量不超過(guò) 2g。浸漬液應選用新沸放冷水或其他適宜的液體，不與供試品作用的液體，必要時(shí)可加入潤濕劑，但應小于浸漬液總體積的 0.1%，以除去小氣泡。在測試過(guò)程中，供試品與該液體接 觸時(shí)，對供試品應無(wú)影響。供試品上端距浸漬液液面應不小于 10mm，供試品表面不能粘附 空氣泡。浸漬液密度應小于供試品密度;當材料密度大于 1 時(shí)可選用水或者無(wú)水乙醇，當材 料密度小于 1 時(shí)可選用無(wú)水乙醇。

 

取供試品適量，置于天平上，精密測定其在空氣中的質(zhì)量(a)，然后將供試品置于盛有 一定量已知密度(ρx)的浸漬液(水或無(wú)水乙醇)中，精密測定其質(zhì)量(b)，按下式計算 容器(材料)的密度。

 

 

【附注】水及無(wú)水乙醇在不同溫度下的密度見(jiàn)表 1、表 2。

 

 

氣體透過(guò)量測定法

本法用于測定藥用薄膜或薄片的氣體透過(guò)量。本法包括壓差法和電量分析法。電量分 析法僅適用于檢測氧氣透過(guò)量。

 

氣體透過(guò)量系指在恒定溫度和單位壓力差下，在穩定透過(guò)時(shí)，單位面積和單位時(shí)間內 透過(guò)供試品的氣體體積。通常以標準溫度和 1 個(gè)標準大氣壓下的體積值表示，單位為: cm3/(m2·24h·0.1MPa)。

 

氣體透過(guò)系數系指在恒定溫度和單位壓力差下，在穩定透過(guò)時(shí)，單位面積和單位時(shí)間 內透過(guò)單位厚度供試品的氣體體積。通常以標準溫度和 1 個(gè)標準大氣壓下的體積值表示， 單位為:cm3·cm/(m2·24h·0.1MPa)。

 

測試環(huán)境:溫度:(23±2) °C，相對濕度:(50±5) %

 

第一法 壓差法 藥用薄膜或薄片將低壓室和高壓室分開(kāi)，高壓室充約 0.1MPa 的試驗氣體，低壓室的體積已知。供試品密封后用真空泵將低壓室內的空氣抽到接近零值。用測壓計測量低壓室的壓力增量 Dp ，可確定試驗氣體由高壓室透過(guò)供試品到低壓室的以時(shí)間為函數的氣體量，但應排除氣體透過(guò)速度隨時(shí)間而變化的初始階段。

 

儀器裝置 壓差法氣體透過(guò)量測定儀，主要包括以下幾部分: 透氣室 由上、下兩部分組成，當裝入供試品時(shí)，上部為高壓室，用于存放試驗氣體，裝有氣體進(jìn)樣管。下部為低壓室，用于貯存透過(guò)的氣體并測定透氣過(guò)程中的前后壓差。測壓裝置 高、低壓室應分別有一個(gè)測壓裝置，高壓室的測壓裝置靈敏度應不低于100Pa，低壓室測壓裝置的靈敏度應不低于5Pa。

 

真空泵 應能使低壓室的壓力不大于 10Pa。 試驗氣體 純度應大于 99.5%。

測定法 除另有規定外，選取厚度均勻，無(wú)褶皺、折痕、針孔及其他缺陷的適宜尺寸的供試品三片，在供試品朝向試驗氣體的一面做好標記，在 23±2 °C環(huán)境下，置于干燥器中， 放置 48 小時(shí)以上，用適宜的量具分別測量供試品厚度，精確到 0.001mm，每片至少測量 5 個(gè)點(diǎn)，取算術(shù)平均值。置儀器上，進(jìn)行試驗。為剔除開(kāi)始試驗時(shí)的非線(xiàn)性階段，應進(jìn)行 10 分鐘的預透氣試驗，繼續試驗直到在相同的時(shí)間間隔內壓差的變化保持恒定，達到穩定透過(guò)。

氣體透過(guò)量(Qg)可由儀器所帶的計算機分析軟件進(jìn)行直接計算得到，也可按下式計算：

 

 

第二法 電量分析法(庫侖計法)

供試品將透氣室分為兩部分。供試品的一側通氧氣，另一側通氮氣載氣。透過(guò)供試品的氧氣隨氮氣載氣一起進(jìn)入電量分析檢測儀中進(jìn)行化學(xué)反應并產(chǎn)生電壓，該電壓與單位時(shí) 間內通過(guò)電量分析檢測儀的氧氣量成正比。

 

儀器裝置 電量分析法氣體透過(guò)量測定儀，儀器主要包括以下幾部分:

 

透氣室 由兩部分構成，應配有測溫裝置，還需裝配適宜的密封件，供試品測試面積根 據測試范圍調整，通常應在 1cm2 到 150cm2 之間。

 

載氣 通常為氮氣或者含一定比率的氫氣和氮氣混合氣。

 

試驗氣體 純度應不低于 99.5%。 電量檢測器(庫侖計) 對氧氣敏感，運行特性恒定，用來(lái)測量透過(guò)的氧氣量。測定法 除另有規定外，選取厚度均勻、平整、無(wú)褶皺、折痕、針孔及其他缺陷的適宜尺寸的供試品三片，在供試品朝向試驗氣體的一面做好標記，在 23°C±2°C環(huán)境下，置于干 燥器中，放置 48 小時(shí)以上，用適宜的量具測量供試品厚度，精確到 0.001mm，至少測量 5 個(gè)點(diǎn)，取算術(shù)平均值。將供試品放入透氣室，然后進(jìn)行試驗，當儀器顯示的值已穩定一段 時(shí)間后，測試結束。

 

氧氣透過(guò)率(RO2)可由儀器所帶的計算機分析軟件進(jìn)行直接計算得到，也可按下式計 算:

 

 

水蒸氣透過(guò)量測定法

本法用于測定藥用包裝材料或容器的水蒸氣透過(guò)量，包括但不限于藥用薄膜或薄片及藥 用包裝容器的水蒸氣透過(guò)量測定。水蒸氣透過(guò)量系指在規定的溫度、相對濕度、一定的水蒸 氣壓差下，供試品在一定時(shí)間內透過(guò)水蒸氣的量。

 

本法包括重量法、電解分析法和紅外檢測器法。如不同測試方法可適用，但測試結果不 一致時(shí)，應以紅外檢測器法的測試結果為準。

 

第一法 重量法

本法主要有基于干燥劑的增重法和基于水溶液的減重法來(lái)進(jìn)行測定的兩類(lèi)方法。

 

1.增重法 測定在規定的溫度、相對濕度環(huán)境下，通過(guò)材料或容器透入的水蒸氣量,通 常用干燥劑的重量增重來(lái)計算。增重法通常又可分為杯式法和容器法兩種。

 

(1)杯式法 系指將供試品固定在特制的裝有干燥劑的透濕杯上，通過(guò)透濕杯的重量增 量來(lái)計算藥用薄膜或薄片的水蒸氣透過(guò)量。一般適用于水蒸氣透過(guò)量不低于 2 g/(m2·24h) 的薄膜或薄片。

 

儀器裝置

恒溫恒濕箱 溫度精度為±0.6°C;相對濕度精度為±2%;風(fēng)速為 0.5~2.5m/s;恒溫 恒濕箱關(guān)閉后，15 分鐘內應重新達到規定的溫、濕度。

 

分析天平 靈敏度為 0.1mg。

 

透濕杯 如圖 1。應由質(zhì)輕、耐腐蝕、不透水、不透氣的材料制成;有效測定面積不得 低于 25 cm2。

 

試驗條件 常用試驗條件如下: A:溫度 23°C±2°C，相對濕度 90%±5% B:溫度 38°C±2°C，相對濕度 90%±5%

 

 

測定法 除另有規定外，選取厚度均勻，無(wú)皺褶、折痕、針孔及其他缺陷的供試品三片， 分別用圓片沖刀沖切，供試品直徑應介于杯環(huán)直徑與杯子直徑之間。將干燥劑放入清潔的杯 皿中，加入量應使干燥劑距供試品表面約 3mm 為宜。將盛有干燥劑的杯皿放入杯子中，然后 將杯子放到杯臺上，供試品放在杯子正中，加上杯環(huán)后，用導正環(huán)固定好供試品的位置，再 加上壓蓋。小心地取下導正環(huán)，將熔融的密封蠟澆灌至杯子的凹槽中，密封蠟凝固后不允許 產(chǎn)生裂紋及氣泡。待密封蠟凝固后，取下壓蓋和杯臺，并清除粘在透濕杯邊及底部的密封蠟。在 23°C±2°C環(huán)境中放置 30 分鐘，稱(chēng)量封好的透濕杯。將透濕杯放入已調好溫度、濕度的 恒溫恒濕箱中，16 小時(shí)后從箱中取出，放在處于 23°C±2°C環(huán)境中的干燥器中，平衡 30 分 鐘后進(jìn)行稱(chēng)量，稱(chēng)量后將透濕杯重新放入恒溫恒濕箱內，以后每?jì)纱畏Q(chēng)量的間隔時(shí)間為 24、 48 或 96 小時(shí)，稱(chēng)量前均應先放在處于 23°C±2°C環(huán)境中的干燥器中，平衡 30 分鐘。直到前 后兩次質(zhì)量增量相差不大于 5%時(shí)，方可結束試驗。同時(shí)取一個(gè)供試品進(jìn)行空白試驗。按下 式計算水蒸氣透過(guò)量(WVT):

 

[附注]

(1)密封蠟 密封蠟應在溫度 38°C、相對濕度 90%條件下暴露不會(huì )軟化變形。若暴露 表面積為 50 cm2，則在 24h 內質(zhì)量變化不能超過(guò) 1mg。例如:石蠟(熔點(diǎn)為 50~52°C)與蜂 蠟的配比約為 85:15。

 

(2)干燥劑 無(wú)水氯化鈣粒度直徑為 0.60~2.36mm。使用前應在 200°C±2°C烘箱中， 干燥 2 小時(shí)。

 

(3)每次稱(chēng)量后應輕微晃動(dòng)杯子中的干燥劑，使其上下混合。

 

(4)試驗結束后，干燥劑吸濕總增量應不得過(guò) 10%。

 

(5)空白試驗系指除杯中不加干燥劑外，其它試驗步驟同供試品試驗。

 

(2)容器法 系指在規定的溫度、相對濕度環(huán)境下，包裝容器內透入的水蒸氣量。一般 適用于口服固體制劑用包裝容器，如固體瓶等。

 

儀器裝置

恒溫恒濕箱 溫度精度為±0.6°C;相對濕度精度為±2%;風(fēng)速為 0.5~2.5m/s。恒溫 恒濕箱關(guān)閉之后，15 分鐘內應重新達到規定的溫、濕度。

 

分析天平 靈敏度為 0.1mg(當稱(chēng)重量大于 200g 時(shí)，靈敏度可不大于 1mg;當稱(chēng)重量大 于 1000g 時(shí)，靈敏度可不大于稱(chēng)重量的 0.01%)。

 

試驗條件 常用試驗條件如下: A:溫度 40°C±2°C，相對濕度 75%±5% B:溫度 30°C±2°C，相對濕度 65%±5% C:溫度 25°C±2°C，相對濕度 75%±5%

 

測定法 除另有規定外，取試驗容器適量，用干燥綢布擦凈每個(gè)容器，將容器蓋連續開(kāi)、 關(guān) 30 次后，在容器內加入干燥劑:20ml 或 20ml 以上的容器，加入干燥劑至距瓶口 13mm 處; 小于 20ml 的容器，加入的干燥劑量為容積的 2/3，立即將蓋蓋緊。另取兩個(gè)容器裝入與干 燥劑相等量的玻璃小球，作對照用。容器緊蓋后分別精密稱(chēng)定，然后將容器置于恒溫恒濕箱 中，放置 72 小時(shí)，取出，用干燥綢布擦干每個(gè)容器，室溫放置 45 分鐘，分別精密稱(chēng)定。按 下式計算水蒸氣透過(guò)量(WVT):

 

 

 

2. 減重法

本法系指在規定的溫度、相對濕度環(huán)境下，一定時(shí)間內容器內水分損失的百分比。一般 適用于口服、外用液體制劑用容器、輸液容器等包裝容器。

 

儀器裝置 恒溫恒濕箱 溫度精度為±0.6°C;相對濕度精度為±2%;風(fēng)速為 0.5~ 2.5m/s。恒溫恒濕箱關(guān)閉之后，15 分鐘內應重新達到規定的溫、濕度。

 

分析天平 靈敏度為 0.1mg (當稱(chēng)重量大于 200g 時(shí)，靈敏度可不大于 1mg;當稱(chēng)重量大 于 1000g 時(shí)，靈敏度可不大于稱(chēng)重量的 0.01%)。

 

試驗條件 常用試驗條件如下: A:溫度 40°C±2°C，相對濕度 25%±5% B:溫度 25°C±2°C，相對濕度 40%±5% C:溫度 30°C±2°C，相對濕度 35%±5% 測定法 除另有規定外，取試驗容器適量，在容器中加入水至標示容量，旋緊瓶蓋，精密稱(chēng)定。然后將容器置于恒溫恒濕箱中，放置 14 天，取出后，室溫放置 45 分鐘后，精密稱(chēng) 定，按下式計算水分損失百分率:

 

 

第二法 電解分析法

本法系指水蒸氣遇電極電解為氫氣和氧氣，通過(guò)電解電流的數值計算出一定時(shí)間內透過(guò)單位面積供試品的水蒸氣透過(guò)總量的水蒸氣透過(guò)量分析方法。

 

儀器裝置 水蒸氣透過(guò)量測定儀，儀器主要包括:

 

透濕室 上端測試皿為高濕腔，通常包含一個(gè)在飽和鹽溶液中浸泡過(guò)的毛玻璃板，以保 持供試品一端的恒定的濕度環(huán)境，下端為與電解槽相通。

 

電解傳感器 可定量測定在其中所攜帶的水蒸氣。試驗條件 常用試驗條件如下: A:溫度 23°C±0.5°C，相對濕度 85%±2% B:溫度 38°C±0.5°C，相對濕度 90%±2%

 

測定法 除另有規定外，選取厚度均勻，無(wú)皺褶、折痕、針孔及其他缺陷的供試品三片， 供試品應在 23°C±2°C，相對濕度 50%±10%的條件下，進(jìn)行供試品調節，調節時(shí)間至少 4 小時(shí)。按儀器使用說(shuō)明書(shū)，進(jìn)行試驗操作，當顯示的值穩定后，測試結束(一般來(lái)說(shuō)，電流 采樣值前后兩次相差不大于 5%時(shí)，可視為達到穩定狀態(tài))。所需相對濕度可通過(guò)鹽溶液調節。常用的溫濕度配制方法見(jiàn)表 1。

 

 

第三法 紅外檢測器法

本法適用于藥用薄膜或薄片等材料片材的水蒸氣透過(guò)量的測定。當供試品置于測試腔 時(shí)，供試品將測試腔隔為兩腔。供試品一邊為低濕腔，另一邊為高濕腔，里面充滿(mǎn)水蒸氣 且溫度已知。由于存在一定的濕度差，水蒸氣從高濕腔通過(guò)供試品滲透到低濕腔，由載氣傳送到紅外檢測器產(chǎn)生一定量的電信號，當試驗達到穩定狀態(tài)后，通過(guò)輸出的電信號計算 出供試品水蒸氣透過(guò)率。

 

儀器裝置 紅外透濕儀(圖 2)，由濕度調節裝置、測試腔、紅外檢測器、干燥管及流量 表等組成。高濕腔的濕度調節可采用載氣加濕的方式或飽和鹽溶液的方式調節，紅外檢測器 與低濕腔相連測定水蒸氣濃度。紅外傳感器對水蒸氣的靈敏度至少為 1μg/L 或 1mm3/dm3。

 

測定法:除另有規定外，選取具有代表性、厚度均勻、無(wú)皺褶、折痕、針孔及其他缺陷的適宜尺寸的供試品三片，供試品應在 23°C±2°C，相對濕度 50%±10%的條件下，進(jìn)行供試 品調節，調節時(shí)間至少 4 小時(shí)。然后進(jìn)行試驗，當儀器顯示的值穩定后，測試結束(一般來(lái) 說(shuō)，輸出的電壓值或儀器顯示的水蒸氣透過(guò)率值前后兩次變化相差不大于 5%時(shí)，可視為達 到穩定狀態(tài)。如果連續兩次輸出值變化未在 5%以?xún)?，應在報告里就試驗終止情況加以說(shuō)明)。

 

水蒸氣透過(guò)量(WVT)也可由儀器所帶的計算機分析軟件進(jìn)行直接計算得到，也可按下 式計算:

 

 

試驗結果以三個(gè)供試品的算術(shù)平均值表示，除高阻隔性能供試品(水蒸氣透過(guò)量結果不大于0.5)外，每一個(gè)供試品測定值與平均值的差值不得超過(guò)平均值的±10%。

 

[附注]試驗具體操作如零點(diǎn)漂移測定、載氣流量調節等應根據所測材料阻隔性能的高低，按照儀器使用說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行。

 

起草單位:上海市食品藥品包裝材料測試所

 

復核單位:江西省藥品檢驗檢測研究院

 

我委擬制定藥包材急性全身毒性檢查法、藥包材熱原檢查法、藥包材溶血檢查法和藥包材細胞毒性檢查法4個(gè)國家藥包材標準，為確保標準的科學(xué)性、合理性和適用性，現將擬制定的藥包材急性全身毒性檢查法、藥包材熱原檢查法、藥包材溶血檢查法和藥包材細胞毒性檢查法4個(gè)國家藥包材標準第二次公示征求社會(huì )各界意見(jiàn)（詳見(jiàn)附件）。公示期為一個(gè)月。請相關(guān)單位認真研核，若有異議，請及時(shí)來(lái)函提交反饋意見(jiàn)，并附相關(guān)說(shuō)明、實(shí)驗數據和聯(lián)系方式。來(lái)函需加蓋公章，收文單位為“國家藥典委員會(huì )辦公室”，同時(shí)將公函掃描件電子版發(fā)送至指定郵箱。公示期滿(mǎn)未回復意見(jiàn)即視為對公示標準草案無(wú)異議。聯(lián)系人：康笑博電 話(huà)：010-67079620電子郵件：421@chp.org.cn收文單位：國家藥典委員會(huì )辦公室地 址：北京市東城區法華南里11號樓郵 編：100061附件：藥包材急性全身毒性檢查法公示稿（第二次）.pdf藥包材熱原檢查法公示稿（第二次）.pdf藥包材溶血檢查法公示稿（第二次）.pdf藥包材細胞毒性檢查法公示稿（第二次）.pdf國家藥典委員會(huì )2019年9月30日

 

藥包材急性全身毒性檢查法本法系將一定劑量的供試品液注入小鼠體內，在規定時(shí)間內觀(guān)察小鼠有無(wú)毒性反應和死 亡情況，以判定供試品是否符合規定的一種方法。試驗動(dòng)物 試驗用小鼠應健康合格。須在同一飼養條件下飼養，同一來(lái)源，同一品種， 性別不限，體重17 g~23g。同一性別的動(dòng)物體重差異應不超過(guò)平均值的±20%。如使用雌 性動(dòng)物，宜未育并無(wú)孕。做過(guò)本試驗的小鼠不得重復使用。將小鼠隨機分為試驗和對照兩組， 每組5只。復試時(shí)每組取18g~19g的小鼠10只。供試品液的制備 制備過(guò)程應按無(wú)菌操作法進(jìn)行。必要時(shí)，制備供試品液前先將供試品 置高壓滅菌器內115°C保持30分鐘。未滅菌供試品根據實(shí)際情況進(jìn)行滅菌處理。除另有規 定外，按品種項下規定的提取介質(zhì)制成供試品液，提取介質(zhì)示例:a) 0.9%氯化鈉注射液;b)新鮮精制植物油(如棉籽油等);c)1:20乙醇0.9%氯化鈉注射液溶液;d) 聚乙二醇400(PEG400)。提取時(shí)應對供試樣品進(jìn)行分割，以使供試品能夠放入容器并浸沒(méi)在提取介質(zhì)中進(jìn)行充分提取，除另有規定外，切成0.5cm×3cm條狀。不計算因分割而產(chǎn)生的表面積增加。由于完 整表面與切割表面可能存在潛在的提取性能差異，必要時(shí)可保持供試品的完整性。除有明確 規定的濃度和提取條件外，照下列表1和表2方式制備供試品液。所選擇的提取條件不應該 引起供試品物理形態(tài)的改變。對照液 提取介質(zhì)(不含有供試品)以相同的方式制備作為對照液。供試品液和對照液應在制備后24h內使用，注射前劇烈振蕩，確?？商崛∥锍浞只靹?。

 

 

檢查法 按照表3規定各組5只小鼠分別注射供試品液或對照液，注射速度為0.1ml/s。PEG400供試品液及介質(zhì)對照液在注射前應使用0.9%氯化鈉注射液以4.1倍稀釋至終濃度200mg/ml后注射。注射后觀(guān)察小鼠即時(shí)反應，并于4h、24h、48h、72h觀(guān)察和記錄試驗組 和對照組動(dòng)物的一般狀態(tài)、毒性表現和死亡動(dòng)物數。在72h時(shí)稱(chēng)量動(dòng)物體重，動(dòng)物反應觀(guān)察 判定按表4進(jìn)行。

 

 

結果判定 如果觀(guān)察期內供試品組動(dòng)物的毒性反應不顯著(zhù)大于對照組動(dòng)物，則判定供試 品合格。如果供試品組動(dòng)物有2只或2只以上出現中度毒性癥狀或死亡，或有3只或3只以 上動(dòng)物體重下降大于2g，則供試品不合格。如任何一供試品組動(dòng)物顯示有輕度的毒性反應， 并且不超過(guò)1只動(dòng)物顯示有中度毒性反應的大體癥狀或死亡，則另取10只動(dòng)物進(jìn)行復試。在72h觀(guān)察期內，供試品組動(dòng)物的反應不大于對照組動(dòng)物，判定供試品合格。起草單位:山東省醫療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗中心 電話(huà):0531-82682901復核單位:上海市食品藥品包裝材料測試所、北京市藥品檢驗所

 

藥包材熱原檢查法本法系將供試品液靜脈注入家兔體內，在規定時(shí)間內，觀(guān)察家兔體溫升高情況，以判定 供試品中所含熱原的限度是否符合規定。試驗動(dòng)物:應符合熱原檢查法(中國藥典四部通則1142)中供試用家兔的規定。試驗前的準備:應符合熱原檢查法(中國藥典四部通則1142)中試驗前準備的規定。供試品液制備:制備過(guò)程應按無(wú)菌操作法進(jìn)行。將供試品用純化水沖洗干凈，用濾紙吸干。除另有規定外，切成0.5cm×3cm條狀，不計算因分割而產(chǎn)生的表面積增加。除另有規 定外，供試品置高壓滅菌器內115°C保持30分鐘。照下列表1和表2方式制備供試品液。供試品液應在制備后2h內使用。

 

 

藥包材溶血檢查法本法系通過(guò)供試品與血液接觸，測定紅細胞釋放的血紅蛋白量以檢測供試品體外溶血程 度的一種方法。試驗前的準備 除另有規定外，采集健康家兔新鮮血液至抗凝采血管中，常見(jiàn)抗凝劑 有3.2%枸櫞酸鈉或2%草酸鉀。取新鮮抗凝兔血8ml，加入0.9%氯化鈉注射液10ml稀釋。供試品的制備 稱(chēng)取3份供試品，每份5g，除另有規定外，一般切成0.5cm×2cm條狀。由于完整表面與切割表面可能存在潛在的提取性能差異，必要時(shí)可保持供試品的完整性。檢查法 除另有規定外，供試品組3支試管，每管加入供試品5g及0.9%氯化鈉注射液10ml;陰性對照組3支試管，每管加入0.9%氯化鈉注射液10ml;陽(yáng)性對照管組3支試管， 每管加入純化水10ml。全部試管放入(37±l)°C恒溫水浴中保溫30分鐘后，每支試管加入0.2ml稀釋兔血，輕輕混勻，置(37±l)°C水浴中繼續保溫60分鐘。倒出管內液體離心5分鐘 (2500r/min)。吸取上清液移入比色皿或酶標儀內，按照分光光度法(中國藥典四部通則0401)，于545nm波長(cháng)處測定吸光度。結果計算 供試品組和對照組吸光度均取3支管的平均值。陰性對照管的吸光度應不 大于0.03;陽(yáng)性對照管的吸光度應為0.8±0.3，否則重新實(shí)驗。按下式計算

 

 

藥包材細胞毒性檢查法本法系將供試品或供試品液接觸細胞，通過(guò)對細胞形態(tài)、增殖和抑制影響的觀(guān)察，評價(jià) 供試品對體外細胞的毒性作用。試驗用細胞 推薦使用小鼠成纖維細胞L-929。試驗時(shí)采用傳代48~72h生長(cháng)旺盛的細 胞。試驗前的準備 與樣品及細胞接觸的所有器具均需無(wú)菌。必要時(shí)可采用濕熱滅菌如115°C保持30分鐘;干熱滅菌如250°C保持30分鐘或用180°C保持2h。供試品液的制備 提取介質(zhì)的選擇宜反映出提取的目的，優(yōu)先選用含血清哺乳動(dòng)物細胞 培養基作為提取介質(zhì)。除另有規定外，按品種項下規定的提取介質(zhì)制成供試品液。將供試品 切成0.5cm×2cm條狀，用濕熱滅菌或紫外線(xiàn)照射消毒后，置玻璃容器內。除另有規定外， 按表1選擇提取比例，使提取液浸沒(méi)供試品，按表2選擇提取條件(若采用含血清培養基， 應用(37±1)°C的條件)。

 

 

1.相對增殖度法陰性對照液制備 為不加供試品的細胞培養液。陽(yáng)性對照液制備 取生物毒性陽(yáng)性參比物質(zhì)，照供試品制備項下的規定進(jìn)行，如6.3%苯 酚的細胞培養液。

 

檢查法取33個(gè)培養瓶，分別加入4×104個(gè)/ml濃度細胞懸液1ml，細胞培養液4ml， 置(37±1)°C，(5±1)%CO2的條件下培養24h。培養24h后棄去原培養液。

 

陰性對照組:取13個(gè)培養瓶加入5ml陰性對照液;陽(yáng)性對照組 取10個(gè)培養瓶加入5ml陽(yáng)性對照液;試驗組:取10個(gè)培養瓶加入5ml含50%供試品液的細胞培養液，置(37±1)°C， (5±1)% CO2的條件下繼續培養7天。細胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察和計數:在更換細胞培養液的當天，取3瓶陰性對照組，并在更換后第2、4、7天，每組各取3瓶進(jìn)行細胞形態(tài)觀(guān)察和細胞計數。毒性評定細胞形態(tài)分析標準按表3規定。

 

 

結果評價(jià)試驗組相對增殖度(以第7天的細胞濃度計算)為0級或1級判為合格。試驗組相對增殖度為2級，應結合形態(tài)綜合評價(jià)，輕微毒或無(wú)毒的判為合格。試驗組相對增殖 度為3級~5級判為不合格。

 

2瓊脂擴散法供試品制備 將樣品用純化水沖洗干凈(根據實(shí)際情況需要)，用濾紙吸干。若用供試品液進(jìn)行試驗，將制備的供試品液附著(zhù)到生物惰性吸收性的基質(zhì)(例如超細硼硅玻璃纖維濾紙)上，制成面積不少于100mm2的圓形供試品。陰性對照制備 取無(wú)生物毒性陰性參比物質(zhì)，例如高密度聚乙烯。按照供試品制備項下的規定進(jìn)行。陽(yáng)性對照制備 取生物毒性陽(yáng)性參比物質(zhì)，例如含二乙基二硫代氨基甲酸鋅的聚氨酯(ZDEC)。按照供試品制備項下的規定進(jìn)行?？刹捎?0%二甲基亞砜(DMSO)溶液，附著(zhù)到 生物惰性吸收性(例如超細硼硅玻璃纖維濾紙)的基質(zhì)上。

 

檢查法取細胞懸浮液(1×105個(gè)/ml)7ml，均勻分散至直徑60mm的培養皿中。置于含(5±1)%CO2氣體的細胞培養箱中培養24h至近匯合單層細胞，棄去培養皿中培養基，將溶化瓊脂冷卻至48°C左右與含20%血清的2倍新鮮哺乳動(dòng)物細胞培養基混合，使瓊脂最終質(zhì)量濃度不大于2%，在每只培養皿內加入新制備的含瓊脂培養基(要足夠薄以利于可瀝濾物的擴散)。含瓊脂培養基凝固后，可用適當的染色方法染色。將供試品、陰性對照、陽(yáng)性對照小心 地放在培養皿的固化瓊脂層表面。每個(gè)供試品、陰性對照、陽(yáng)性對照試樣間盡量保持合適的距離并遠離培養皿壁，每一培 養皿中放置不超過(guò)3個(gè)試樣，每個(gè)試樣至少設置2個(gè)平行。置(37±1)°C含(5±1)% CO2的 細胞培養箱中至少培養(24±2)h。用顯微鏡觀(guān)察每個(gè)供試品、陰性對照、陽(yáng)性對照試樣反應 區域。用活體染料如中性紅可有助于檢測細胞毒性。

 

結果評價(jià)按表5進(jìn)行細胞毒性評價(jià)和分級。如陰性對照為0級(無(wú)毒)、陽(yáng)性對照不小于3級(中 度毒)，則細胞培養試驗系統有效。

 

 

檢測提取液時(shí)，供試品液的反應區域應減去介質(zhì)對照的反應區域，再進(jìn)行毒性分級。供試品和/或供試品液細胞毒性分級不大于2級(輕度毒)時(shí)，則判為合格。

 

3直接接觸法供試品制備 采用供試品的平整部分，表面積不小于100mm2。陰性對照制備 取高密度聚乙烯參比物質(zhì)，照供試品制備項下的規定進(jìn)行。陽(yáng)性對照制備 取生物毒性陽(yáng)性參比物質(zhì)，照供試品制備項下的規定進(jìn)行。

 

檢查法取生長(cháng)旺盛的細胞懸浮液(1×105個(gè)/ml)2ml，置直徑35mm的平皿中培養單層細胞。置于細胞培養箱中培養24h至近匯合單層細胞，吸去培養基，替換為0.8ml的新鮮培養基。在每個(gè)培養皿中單獨放置1個(gè)供試品、陽(yáng)性對照或陰性對照，每個(gè)試樣至少設置2個(gè)平行。將所有的培養物置(37±1)°C含(5±1)% CO2的細胞培養箱中至少培養24h，培養 箱宜保持適當的濕度。顯微鏡下觀(guān)察每個(gè)供試品、陰性對照、陽(yáng)性對照周?chē)?，必要時(shí)應進(jìn)行 染色。

 

結果評價(jià)按照瓊脂擴散法結果評價(jià)項下的規定進(jìn)行。若樣品不超過(guò)2級(輕微毒)，則 樣品判為合格。若試驗系統無(wú)效需重復試驗過(guò)程。

 

4提取法陰性對照制備 取高密度聚乙烯參比物質(zhì)，照供試品溶液制備項下的規定進(jìn)行。陽(yáng)性對照制備 取生物毒性陽(yáng)性參比物質(zhì)，照供試品溶液制備項下的規定進(jìn)行。檢查法 取生長(cháng)旺盛的細胞懸浮液(1×105個(gè)/ml)2ml，置直徑35mm的平皿中培養單層細胞。培養不少于24h細胞至少達到80%近匯合后，吸去培養基，替換為供試品液、陰性 對照液或陽(yáng)性對照液。含血清培養基提取液和不含血清培養基提取液無(wú)需稀釋?zhuān)叫性囼?份。0.9%氯化鈉注射液為介質(zhì)的提取液用含血清的細胞培養基稀釋至提取液濃度為25%， 平行試驗2份。所有的培養物在(37±1)°C，含(5±1)%CO2的培養箱中培養48h。48h后， 在顯微鏡下觀(guān)察培養物，如有必要，進(jìn)行染色。結果評價(jià) 按表6進(jìn)行毒性評價(jià)和分級。若試驗系統不成立，重復試驗。供試品不超過(guò)2級(輕微毒)，則判為合格。如需進(jìn)行劑量-反應程度評價(jià)，可通過(guò)定量稀釋供試品液，重復試驗。

 

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